Abstract
We analyzed 11
H. pylori isolates from humans using the artificial chromogenic substrate paranitrophenylphosphorylcholine to detect phospholipase C (PLC) activity. The range of PLC in sonicates was 8.8–92.3 (Mean 56.9 ± 6.5) nmol of substrate hydrolysed min
−1 mg
−1 protein; the amount of activity was not associated with urease or cytotoxin levels. Addition of sorbitol or glycerol enhanced PLC activity of
H. pylori sonicate and purified PLC from
C. perfringens (PLC 1) but not purified PLC from
B. cereus (PLC3 ).
H. pylori sonicates had little acid phosphatase and no detectable alkaline phosphatase activity, and
H. pylori PLC showed markedly different biochemical characteristics from either phosphatase. In total, these studies indicate that activity measured in
H. pylori sonicate by PLC assay is due to PLC and not phosphatase activity. The temperature optimum for PLC activity of
H. pylori sonicate was 56 °C and for PLC 1 was 65 °C. For
H. pylori PLC and PLC 1, optimal activity occurred at pH 8. Despite multiple similarities between
H. pylori PLC and PLC1, known PLC inhibitors show different interactions with each enzyme. Although PLC activity is present in many subcellular constituents of
H. pylori, including culture supernatants and water extracts, highest specific activity is associated with a membrane-enriched fraction.
Unter Verwendung des künstlichen chromogenen Substrats Paranitrophenylphosphorylcholin analysierten wir 11
H. pylori-Isolate menschlichen Ursprungs zum Nachweis von Phospholipase C (PLC)-Aktivität. Der PLC-Bereich in den ultraschallbehandelten Proben lag zwischen 8,8 and 92,3 (Mittel 56,9 ± 6,5) nmol hydrolysierten Substrats min
−1 mg
−1 Protein. Die Höhe der Aktivität zeigte keinen Zusammenhang mit den Urease- oder Zytoto xinspiegeln. Ein Zusatz von D-Sorbit oder Glyzerin verbesserte die PLC-Aktivität des
H. pylori-Sonikats and der gereinigten PLC von
C. perfringens (PLC 1), aber nicht der gereinigten PLC von
B. cereus (PLC3).
H. pylori-Sonikate wiesen wenig saure Phosphatase and keine Aktivität alkalischer Phosphatase auf, und
H. pylori-PLC zeigte von beiden Phosphatasen deutlich unterschiedene biochemische Eigenschaften. Insgesamt weisen these Untersuchungen darauf hin, daß die mit dem PLC-Assay im
H. pylori-Sonikat gemessene Aktivität auf PLC and nicht auf Phosphatase zurückzuführen ist. Das Temperaturoptimum für die PLC Aktivität des
H. pylori-Sonikats lag bei 56 −C and fur PLC 1 bei 65 −C. Bei PLC 1 and PLC von
H. pylori trat die optimale Aktivität bei pH 8 auf. Trotz mehrfach vorliegender Ähnlichkeiten zwischen PLC 1 and PLC von
H. pylori zeigten bekannte PLC-Inhibitoren unterschiedliche Wechselwirkungen mit den beiden Enzymen. Obwohl bei subzellulären Bestandteilen von
H. pylori sowie auch bei Kulturüberständen and wüßigen Extrakten PLC-Aktivität vorkam, war die höchste spezifische Aktivität mit einer Membran-angereicherten Fraktion verbunden.